انواع نمونه و روند کاری

آزمایشگاه  پیوند مغز استخوان واقع در بیمارستان آیت الله طالقانی (ره) یک آزمایشگاه خصوصی است که از بیماران و آزمایشگاه های همکار جهت انجام آزمایش های تخصصی و مختلف  نمونه می پذیرد. همچنین از بیمارانی که به صورت حضوری مراجعه می کنند نمونه تهیه شده و نتیجه آزمایش در کوتاه ترین زمان ممکن توسط تکنسین های با تجربه آزمایشگاه آماده می-شود.

 نمونه های ارسالی به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان شامل: آسپیره مغز استخوان، خون محیطی و مایعات بیولوژیک مانند: CSF مایع پلور می باشند که از مراکز مختلف و حتی شهرهای دیگر برای ارزیابی ارسال می گردند.

  در آزمایشگاه پیوند مغزاستخوان، پس از بررسی اطلاعات بالینی بیمار، نمونه ارسالی به آزمایشگاه مولکولی و فلوسایتومتری به شکل همزمان جهت تشخیص قطعی بدخیمی، تعیین پیش آگهی بیماری (risk stratification)، پایش روند درمان (MRD) مورد بررسی قرار می گیرد.

نمونه های ارسالی به آزمایشگاه پیوند شامل موارد زیر می باشد:

۱.آسپیره ی مغز استخوان (Bone Marrow Aspiration-BMA)آسپیراسیون آزمایشگاه پیوند مغز استخوان

آسپیراسیون مغز استخوان روشی برای جمع‌آوری و بررسی مغز استخوان (بافت اسفنجی در داخل برخی استخوان‌های بزرگ) است. آسپیراسیون مغز استخوان نشان می‌دهد که آیا مغز استخوان سالم است و مقدار کافی سلول‌های خونی می‌سازد یا خیر.

پزشک‌ها آسپیراسیون مغز استخوان را برای تشخیص و پیگیری درمان بیماری‌های خون و مغز استخوان مانند برخی سرطان‌ها و اختلالات خونی مورد استفاده قرار می دهند.

برای انجام آسپیراسیون پزشک یک برش کوچک ایجاد می‌کند تا ورود سوزن آسان‌تر انجام شود. یک سوزن توخالی از طریق استخوان وارد مغز استخوان می‌شود.

 

نمونه (برای تمامی تست ها) می بایست داخل لوله حاوی ضد انعقاد EDTA و در شرایط حفظ زنجیره سرمایی به آزمایشگاه ارسال شود. (در صورتی که نمونه از سایر شهر ها ارسال می شود باید زنجیره سرمایی حفظ شده و نهایتا نمونه 24 ساعت پس از نمونه گیری به آزمایشگاه تحویل داده شود.
همچنین از یخ زدگی نمونه باید جلوگیری به عمل بیاید، یخ زدگی یا گرما سبب مرگ و از بین رفتن مورفولوژی و مارکر های پروتئینی سلول های خونی می شود).

آزمایشگاه پیوند مغز استخوان Peripheral Blood-PB

۲.نمونه خون محیطی (Peripheral Blood-PB)

خون محیطی یا خون کامل، دارای سلول های خونی متعددی است که شامل اریتروسیت ها (گلبول های قرمز)، لوکوسیت ها (گلبول های سفید) و توموسیت ها (پلاکت ها) می باشد و در پلاسما محلول هستند.

به طور کلی ماده اصلی تشکیل دهنده پلاسما آب می باشد ولی پروتئین ها، گلوکز، یون ها، هورمون ها و فاکتور های لخته کننده نیز از دیگر از اجزای تشکیل دهنده آن هستند.

خون محیطی برای تشخیص و پیگیری اختلالات خونی و بدخیمی های خونی و همچنین انجام تست مولکولی HLA-Typing جهت انجام  پروسه‌ی پیوند مغز استخوان به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان ارسال می شود.

نمونه می بایست مشابه نمونه آسپیره ی مغز استخوان، داخل لوله حاوی ضد انعقاد EDTA و در شرایط حفظ زنجیره  سرمایی به آزمایشگاه ارسال شود.

(در صورتی که نمونه از سایر شهر ها ارسال می شود باید زنجیره سرمایی حفظ شده و نهایتا نمونه 24 ساعت پس از نمونه گیری به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان تحویل داده شود. همچنین از یخ زدگی نمونه باید جلوگیری به عمل بیاید، یخ زدگی یا گرما سبب مرگ و از بین رفتن مورفولوژی و مارکر های پروتئینی سلول های خونی می شود).

 

۳.مایعات بیولوژیک شامل:

۱) مایع مغزی نخاعی (CSF) و شرایط ارسال به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان

مایع مغزی نخاعی (CSF) مایعی شفاف، بی رنگ و آبکی است که در داخل و اطراف مغز و نخاع جریان دارد. مغز و نخاع سیستم عصبی مرکزی را تشکیل می دهند. هر کاری را که انسان انجام می‌دهد، کنترل و هماهنگ می‌کند، از جمله توانایی برای حرکت، نفس کشیدن، دیدن فکر کردن و موارد دیگر.

هدف از ارسال این نمونه به آزمایشگاه پیوند سلول های بنیادی، بررسی حضور سلول های بدخیم در مایع مغزی-نخاعی است. زیرا در برخی از بدخیمی های خونی، علی الخصوص بدخیمی های نوع حاد احتمال متاستاز به CSF وجود دارد که عوارض جبران ناپذیری دارد.

نمونه CSF نمونه بسیار حساسی است، نمونه گیری توسط پزشک و با دقت فراوان انجام می گیرد. نمونه برداری مایع مغزی نخاعی یا LP باید به گونه ای انجام شود که نمونه با خون محیطی آلوده نشود. زنجیره سرمایی تا زمان ارسال نمونه به آزمایشگاه باید رعایت شود.

همچنین از یخ زدگی نمونه باید جلوگیری به عمل بیاید، یخ زدگی یا گرما سبب مرگ و از بین رفتن مورفولوژی و مارکر های پروتئینی سلول های خونی می شود.

۲) مایع پلور (Pleural Fluid) و شرایط ارسال به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان

مایع پلور یا مایع جنب مایعی است که در میان لایه های پلورا می باشد. پلورا غشای دولایه ای است که نقش پوشانندگی ریه ها را دارد و در بر گیرنده ی حفره ی سینه است.

مایع جنب فضای این غشا ها را مرطوب نگه داشته و به کاهش اصطحکاک بین غشاها موقع تنفس کمک می کند. این مایع در برخی از بدخیمی های خونی به دلیل متاستاز سلول های بدخیم می تواند آلوده شود، لذا در صورتی که پزشک احتمال متاستاز را بدهد، نمونه برداری انجام گرفته و ارسال می شود. نمونه برداری باید به گونه ای انجام شود که نمونه با خون محیطی آلوده نشود.

زنجیره سرمایی تا زمان ارسال نمونه به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان باید رعایت شود . همچنین از یخ زدگی نمونه باید جلوگیری به عمل بیاید، یخ زدگی یا گرما سبب مرگ و از بین رفتن مورفولوژی و مارکر های پروتئینی سلول های خونی می شود.

آزمایشگاه پیوند REAL TIME PCR ریل تایم پی سی آر ژ«تیک مولکولی آژمایش ژنتیک مولکولی

در این موارد بعد از فرآیند سلول گیری کیسهء حاوی سلول های بنیادی باید تحت فرآیندهای Graft manipulation قرار گیرد.آزمایشگاه کشت سلول با هدف پاسخگویی به نیازهای اساتید، دانشجویان و محققین به تازگی راه اندازی شده است.

این آزمایشگاه مجهز به یک clean room با تمام تجهیزات مورد نیاز کشت شامل هود لامینارکلاس، انکوباتور CO2، سانتریفیوژ میکروسکوپ نوری و اینورت، اتوکلاوه، تانک ازت را در خود جای داده است.

فرآیند جداسازی باید در شرایط کاملاً استریل و توسط کادری مجرب انجام شود، چرا که اهمیت بالایی در روند درمان دارد و هرگونه خلل در این فرآیند موجب آلودگی، از دست رفتن سلول های بنیادی CD34+ و… می گردد.

مراحل پذیرش نمونه ها در آزمایشگاه پیوند مغز استخوان:

نمونه های دریافت شده  درآزمایشگاه پیوند مغز استخوان می بایست حاوی نسخه ی پزشک متخصص باشد. بیماران توجه فرمایند که کپی از قسمتی از پرونده‌ی پزشکی بیمار که شامل تاریخچه تشخیص بیماری قبلی یا گزارشات تست های بالینی شامل رادیوگرافی، رادیولوژی، نتایج تست های آزمایشگاهی جهت دریافت History بیمار همراه نمونه تحویل پذیرش آزمایشگاه پیوند مغز استخوان داده شود.

همچنین در صورت نیاز شرح حال توسط همکاران مربوطه از بیمار یا پزشک بیمار دریافت می شود. بیمارانی که جهت انجام تست HLA-Typing مراجعه کرده اند، به دو گروه تقسیم می شوند:

  • افرادی که به عنوان بیمار کاندید پیوند مغز استخوان یا اهداکننده خویشاوند هدف دار به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان مراجعه کرده اند.
  • افرادی که داوطلبانه برای اهدای سلول های بنیادی مراجعه می کنند.
  • از هر دو گروه مراجعه کننده به آزمایشگاه پیوند مغز استخوان نمونه خون محیطی گرفته می شود و اطلاعات و شرح حال مورد نیاز توسط همکار مربوطه از فرد آزمایش دهنده گرفته می شود.
  • نمونه باید شرایط لازم جهت پذیرش را داشته باشد.

در هیچ کدام از تست ها، نیاز به شرایط خاصی پیش از نمونه گیری وجود ندارد.( نیاز به ناشتایی ندارد.)

موارد عدم پذیرش نمونه:

  • نمونه ای که در محیط انتقالی نامناسبی انتقال یابد.
  • نمونه های با برچسب اشتباه یا بدون برچسب
  • حجم ناکافی نمونه
  • تاخیر در رساندن نمونه به آزمایشگاه پس از آسپیراسیون.
  • تمامی نمونه ها در لوله حاوی ضد انعقاد EDTA ارسال شود.

تمامی نمونه ها به جز نمونه خون محیطی در مواردی توسط پزشک گرفته شده و ارسال می شود. نمونه خون محیطی در صورتی که توسط پزشک گرفته نشود توسط پرسنل آزمایشگاه از بیمار گرفته می شود.

شرایط نگهداری:

پس از نمونه گیری، در کوتاه ترین زمان ممکن، نمونه باید آنالیز گردد. نمونه را می توان تا پیش از آزمایش در دمای یخچال نگاه داشت. نتایج به دست آمده از بررسی ها، پس از بازبینی مجدد و تفسیر در اسرع وقت در اختیار همکاران بالینی قرار می گیرد (در صورت امکان ۲۴ساعت).

در آزمایشگاه فلوسایتومتری علاوه بر تشخیص و پایش بدخیمی های خونی، بررسی بیماری های نقص ایمنی و کم خونی هموگلوبینوری حمله ای شبانه ((PNH انجام می شود. یکی دیگر از خدمات منحصر به فرد آزمایشگاه پیوند، HLA-typing است.

از آنجایی که پیوند سلول های بنیادی خونساز، می تواند بعنوان آخرین روش درمانی در بسیاری از بیمارهای خونی و غیرخونی باشد و از طرفی پیدا کردن اهداکننده مناسب در بین خویشاوندان بیمار همیشه امکان پذیر نیست، این مرکز با هدف تکمیل بانک HLA ایران، اقدام به جذب اهداکنندگان داوطلب و تعیین HLA    آن ها می نماید تا در صورت نیاز از این داوطلبان برای اهداء سلول های بنیادی دعوت به عمل آید.

در آزمایشگاه پیوند مغز استخوان، سلول های بنیادی به منظور ارتقاء سطح خدمات و قابل دسترس کردن نیازهای بیماران، روندهای Graft manipulation از ابتدای راه اندازی بخش تاکنون انجام می گیرد. علاوه بر امکانات و تجهیزات نام برده در بالا، این مرکز مجهز به یک اتاق سرد (cold room) جهت نگهداری نمونه های تحقیقاتی در شرایط دمایی استاندارد تا زمان انجام تست است.

گالری تصاویر

اعضا آزمایشگاه پیوند

دکتر محمد حسین محمدی

دکتر محمد حسین محمدی
مسئول فنی آزمایشگاه پیوند

Dr. Elham Roshandel, Ph.D. in hematology and technical manager of transplant laboratory

دکتر الهام روشندل
دکترای هماتولوژی و مسئول فنی آزمایشگاه پیوند

Peyvand Laboratory

دکتر شقایق شاهسون
دکترای سلول درمانی و سرپرست بخش فلوسایتومتری

آزمایشگاه پیوند

مرجان اسدی
کارشناسی ارشد هماتولوژی و کارشناس فلوسایتومتری

جواد گرآوند
کارشناسی ارشد و مسئول بخش مولکولی

مینا حاجی فتحعلی
مسئول پذیرش

تست های آزمایشگاه پیوند مغز استخوان

آزمایشگاه پیوند

درباره تست های آزمایشگاه پیوند بیشتر بدانید:

فلوسایتومتری (Flow-cytometry)

فلوسایتومتری (Flow-cytometry) تکنولوژی آزمایشگاهی برگرفته از مفهوم اندازه­ گیری (measurement) سلول (cell) در جریان مایع (Fluid) است. این تکنیک بر پایه لیزر بوده که از آن جهت شناسائی و بررسی خصوصیات فیزیکی و شیمیائی سلول­ ها و ذرات استفاده می­شود. در طول فرآیند، نمونه ای از سلول ها یا ذرات در مایع معلق می شود و به دستگاه فلوسایتومتر تزریق می ­شود.

بیشتر بخوانید
فلوسایتومتری (Flow-cytometry)

ژنتیک مولکولی

ژنتیک مولکولی از ابزارهای آزمایشگاهی زیست شناسی مولکولی برای ارتباط دادن تغییرات در ساختار و توالی ژن های انسانی به تغییرات عملکردی در عملکرد پروتئین و در نهایت به سلامت و بیماری استفاده می کند. فناوری جدیدی که برای پروژه ژنوم 1000 دلاری در حال توسعه است، نویدبخش افزایش گستردگی و دامنه ژنتیک مولکولی را می دهد. تفاسیر نتایج آزمایشگاه ژنتیک مولکولی بالینی همیشه ریشه در مبانی زیست‌شناسی مولکولی و سلولی و در پارادایم مرکزی دارد که ژن‌ها پروتئین‌ها را کد می‌کنند. از این ریشه ها است که پزشکی مدرن و شخصی رشد خواهد کرد.

بیشتر بخوانید

تست HLA Typing

سیستم آنتی ژن لکوسیت انسانی (HLA) مجموعه ای از پروتئین های پیچیده سازگاری بافتی اصلی (MHC) در انسان است. آنها پروتئین های سطح سلولی هستند که نقش مهمی در سیستم ایمنی بدن انسان دارند. مطالعات نشان داده اند که HLA برای دفاع از بیماری، محافظت در برابر سرطان، رد پیوند اعضا حیاتی است. آزمایش معمولاً فقط در شرایط یک پیوند برنامه ریزی شده انجام می شود که در آن شما گیرنده پیوند مورد نظر یا اهداکننده احتمالی هستید یا خیر.  HLA TYPING TEST آزمایش ژن‌ها و(HLA) را که به ارث برده‌اید شناسایی , آنتی‌بادی‌هایی را برای آنتی‌ژن‌های HLA که باعث می‌شود پیوند ناموفق باشد، را نیز مشخص خواهد کرد می‌کند . همچنین ممکن است آزمایش برای شناسایی انواع آنتی ژن HLA در اهداکنندگان خون پلاکتی انجام شود که با گیرندگان انتقال خون مطابقت دارند.

بیشتر بخوانید
تست HLA Typing

تست جهش CALR

کاربرد تست جهش CALR

تست جهش CALR برای کمک به تشخیص و طبقه بندی اختلالات مغز استخوان که منجر به تولید بیش از حد سلول های خونی می شود، استفاده می شود. این اختلالات به عنوان نئوپلاسم های میلوپرولیفراتیو (MPN) شناخته می شوند. ). آزمایش برای ناهنجاری های ژنتیکی مرتبط با MPN ها معمولاً به عنوان پیگیری انجام می شود در صورتی که فردی دارای افزایش قابل توجهی هموگلوبین، هماتوکریت، تعداد گلبول های قرمز و/یا پلاکت ها باشد، یا یافته های اسمیر خونی که نشان دهنده میلوفیبروز است.

بیشتر بخوانید

کایمریسم

از نقطه نظر پزشکی، کلمه کایمرا برای تعریف فردی استفاده می شود که جمعیت سلولی در آن از افراد ژنتیکی متفاوت وجود دارد. این پدیده می تواند به صورت خود به خود رخ دهد، مانند موارد انتقال جنین به جنین یا انتقال جنین به مادر، یا به صورت مصنوعی در مورد پیوند سلول های بنیادی خونساز آلوژنیک .

بیشتر بخوانید
آزمایشگاه پیوند

ژانوس کیناز ۲ (JAK2)

ژانوس کیناز ۲ (که معمولاً JAK2 نامیده می شود) یک تیروزین کیناز غیر گیرنده است. ژن JAK2 دستورالعمل هایی را برای ساخت پروتئینی ارائه می دهد که باعث رشد و تقسیم (تکثیر) سلول ها می شود. این پروتئین بخشی از یک مسیر سیگنالینگ به نام مسیر JAK/STAT است که سیگنال های شیمیایی را از خارج سلول به هسته سلول منتقل می کند. 

بیشتر بخوانید

پروتئین NPM1

پروتئین NPM1 (Nucleophosmin 1) در چندین فرآیند سلولی از جمله تکثیر سانتروزوم، نقش چاپرونی (تثبیت پروتئین های (misfold و تکثیر سلولی نقش دارد. فسفوپروتئین تولید شده بین هسته، هسته و سیتوپلاسم جابه‌جا می‌شود و در پروسه چاپرونی پروتئین‌های ریبوزومی و هیستون‌های هسته از هسته به سیتوپلاسم نقش دارد.  این پروتئین همچنین سرکوبگر تومور ARF  را در هسته جدا می کند و تا زمانی که مورد نیاز باشد از آن در برابر تخریب محافظت می کند. سه نوع اصلی رونوشت NPM1 وجود دارد که طولانی‌ترین آنها (یعنی نسخه 1، NPM1 ) شامل 11 قطعه اگزون کدکننده است و یک پروتئین 294 اسید آمینه ای تولید می‌کند. جهش در این ژن با لوسمی میلوئید حاد مرتبط است.

بیشتر بخوانید
NPM1

تست BCR-ABL

تست BCR-ABL یک آزمایش ژنتیکی است که برای تشخیص برخی از سرطان‌های خونی استفاده می‌شود. در این آزمایش، وجود توالی ژنی BCR-ABL بر روی کروموزوم 22 بررسی می‌شود که به تشخیص این نوع سرطان‌ها کمک می‌کند. همچنین، این آزمایش برای پایش اثربخشی درمان و تشخیص بازگشت سرطان نیز استفاده می‌شود. BCR-ABL در واقع یک توالی ژنی غیر طبیعی است که به‌ دلیل جابه‌جایی کروموزومی مابین کروموزوم ۲۲ و کروموزوم ۹ ایجاد می‌شود.

بیشتر بخوانید
تست BCR-ABL

تست بیماری لوسمی حاد پرومیلوسیتیک

بیماری لوسمی حاد پرومیلوسیتیک (APL) Acute Promyelocytic Leukemia یک زیرنوع منحصر به فرد از لوسمی مغز استخوان حاد (AML) است. در این بیماری، سلول‌های پرومیلوسیتیک (سلول‌های ناکامل گلبولهای سفید) بیش از حد تولید می‌شوند و در استخوان‌های مغزی تجمع می‌یابند.  

بیشتر بخوانید
بیماری لوسمی حاد پرومیلوسیتیک

تست ژن CEBPA

ژن CEBPA (CCAAT/enhancer-binding protein alpha) پروتینی را به همین نام کدگذاری میکند که  برای تنظیم تمایز سلول‌های خونی مهم است. این پروتئینی یک فاکتور رونویسی است که به مناطق خاصی از DNA متصل می شود و به کنترل فعالیت ژن های خاصی کمک می کند که در رشد و تکامل برخی سلول های خونی نقش دارد. همچنین، این پروتئین به عنوان یک سرکوبگر تومور عمل می کند، به این معنی که در مکانیسم های سلولی جلوگیری از رشد و تقسیم نامنظم و یا بیش از حد سلول ها دخیل است.

بیشتر بخوانید
CEBPA gene

تست ژن FLT3

 (fms-like tyrosine kinase 3) FLT3  یک ژن است که دستورالعمل‌های ساخت پروتئینی به نام FLT3 را فراهم می‌کند که عضوی از خانواده پروتئین‌های تایروزین کیناز گیرنده (RTKs) است.  FLT3 یک گیرنده سایتوکین است که به کلاس III تایروزین کیناز گیرنده تعلق دارد و بر روی سطح بسیاری از سلول‌های پیش‌ساز خونی بیان می‌شود.

بیشتر بخوانید

ژن MPL

Driver mutations ، جهش‌هایی هستند که در فعال‌سازی مسیرهای سیگنالی در سلول‌ها نقش اساسی دارند و باعث تغییرات بالینی در بیماری‌ها می‌شوند. بیماران نئوپلاسم‌های میلوپرولیفراتیو (MPN) دارای Driver mutations در ژن‌های JAK2،  MPL یا CALR هستند که منجر به فعال‌سازی گیرنده ترومبوپوئیتین (TPOR) و مسیرهای سیگنالی پایین‌دست می‌شوند.

بیشتر بخوانید
Driver mutations ، جهش‌هایی هستند که در فعال‌سازی مسیرهای سیگنالی در سلول‌ها نقش اساسی دارند و باعث تغییرات بالینی در بیماری‌ها می‌شوند. بیماران نئوپلاسم‌های میلوپرولیفراتیو (MPN) دارای Driver mutations در ژن‌های JAK2، MPL یا CALR هستند که منجر به فعال‌سازی گیرنده ترومبوپوئیتین (TPOR) و مسیرهای سیگنالی پایین‌دست می‌شوند.

اقدامات لازم جهت انجام آزمایش

در هنگام جمع آوری نمونه آٰرامش خود را حفظ کرده و دستورالعمل های لازم که به شما داده میشود را رعایت فرمایید.

تست های انجام شده در این آزمایشگاه پیوند مغز استخوان نیازمند ناشتا بودن نیست.

درمورد بیماری های زمینه ای خود به تکنسین آزمایشگاه پیوند مغز استخوان اطلاع دهید.